Întrucât preocupările legate de virusul pestei porcine africane (ASFv) continuă să afecteze foarte mult industria porcină, uneori poate fi dificil de interpretat și conciliat rezultatele cercetărilor opuse. Un exemplu recent în acest sens implică studii separate legate de temperatura necesară pentru inactivarea ASFv pentru a preveni transmiterea, informeaz[ PigProgress.

2 lucrări, 2 concluzii diferite privind inactivarea ASFv

Timpul și temperatura sunt în prezent cele mai bune modalități de a dezactiva ASFv. Cu toate acestea, diferite metode de evaluare a timpului și a temperaturii pot duce la rezultate diferite.

În 2023, Universitatea din Minnesota (UMN) a lansat date pretipărite care indică faptul că 2 mega-virusuri ADN dublu catenar, multistratificat, înveliți cu membrană, virusul Emiliania huxleyi (EhV) și virusul ASF, au fost deteriorați prin tratament termic, dar au rămas potențial viabile atunci când au fost expuși. la temperaturi de până la 100°C timp de 20 de minute.

Cu toate acestea, într-un articol de jurnal publicat în Patogeni, publicat și în 2023, laboratorul german de referință ASFv a raportat că 59 ° C a eliminat eficient infecțiozitatea ASFv.

De ce rezultatele acestor două lucrări au concluzii foarte diferite? Principala diferență se bazează pe metodele utilizate pentru a evalua capacitatea potențială infecțioasă a PPA supusă diferitelor tratamente termice.

UMN: Metodă PCR viabilă

UMN a folosit o metodă PCR „viabilă”, care folosește un colorant special pentru a pătrunde în membrana mega-virusurilor deteriorate de tratamentul termic (vezi Figura 1). Teoria este că colorantul poate pătrunde în membrana deteriorată și se poate lega de genomul ADN, interferând astfel cu replicarea PCR.

Cu toate acestea, colorantul nu pătrunde în membranele nedeteriorate. Prin urmare, metoda PCR viabilă descrisă de UMN poate face distincția între particulele de virus membranar intacte față de particulele de virus membranar deteriorate, ceea ce este un avantaj față de metodele PCR standard care detectează doar genomul, indiferent de gradul de deteriorare a membranei.

Nicio altă replicare?

Descoperirea penetrării limitate a colorantului atât în EhV, cât și în ASFv, chiar și atunci când este expus la temperaturi de până la 100°C timp de 20 de minute, este o observație interesantă care necesită cercetări suplimentare. Cu toate acestea, acest lucru nu înseamnă neapărat că particulele de virus sunt încă capabile să provoace infecție.

Chiar dacă colorantul nu pătrunde în membranele nedeteriorate, acest lucru nu înseamnă că tratamentul nu a deteriorat genomul virusului și l-a făcut incapabil de replicare ulterioară. De exemplu, expunerea la lumina ultravioletă (UV-C) dăunează reticulare a genomului, făcând virusul incapabil de replicare, dar nu dăunând neapărat membrana virusului.

Acest aspect al metodei PCR viabile de a echivala rezistența la penetrarea colorantului cu capacitatea particulei de virus de a infecta o celulă animală nu a fost validat științific pentru ASFv. De fapt, în aceeași publicație a UMN, autorii au evaluat și infecțiozitatea EhV în cultura celulară, iar expunerea la 50°C și 60°C a fost suficientă pentru a elimina infecția virală după 30 de secunde.

Laboratorul german de referință ASFv

Laboratorul german de referință ASFv a folosit metoda istorică larg acceptată pentru a examina infecțiozitatea ASFv după compostarea carcaselor infectate de mistreți. Această abordare este o metodă validată științific pentru evaluarea infecțiozității ASFv folosind o metodă de izolare a virusului cu macrofage derivate din sângele periferic de porc.

Mecanismul primar de infecție cu ASFv este prin fagocitoza de către celulele macrofage porcine. Expunerea ASFv la celulele lor macrofage țintă în cultură oferă condiții de fagocitoză care imită o infecție naturală.

Studiul a arătat că ASFv nu mai era infecțios odată ce temperatura grămezii de compost a atins 59°C, deși genomul ASFv folosind metoda standard PCR a rămas prezent, confirmând din nou că metodele standard PCR nu fac diferența între virusul viabil și cel neviabil.

Având în vedere deteriorarea limitată a membranei raportată de UMN, pierderea infecțiozității la 59 ° C sugerează că o parte a genomului ASFv sau componentele cheie ale membranelor au fost deteriorate, făcându-l incapabil de infecție.

Datele de inactivare termică din laboratorul german de referință ASFv confirmă rezultatele studiilor anterioare conform cărora 60 ° C timp de 30 de minute și 60 ° C timp de 15-20 de minute au fost suficiente pentru a inactiva infecțiozitatea ASFv. De asemenea, directiva UE 2002/99/EC recunoaște că tratamentul termic la o temperatură minimă de 80°C este suficient pentru a inactiva ASFv în carne.

Genom viabil potențial vs infecțiozitate

Un potențial genom viabil nu este egal cu infecțiozitatea. Este bine cunoscut faptul că ADN-ul este foarte stabil la temperaturi sub 100°C. Testele PCR depind de faptul că ADN-ul rămâne stabil la 95°C. Prin urmare, nu este surprinzător că testele PCR pot detecta genomul ASFv chiar și după un tratament termic la 100°C.

Pătrunderea limitată a colorantului chiar și atunci când atât EhV, cât și ASFv au fost expuse la temperaturi de până la 100°C timp de 20 de minute este o descoperire foarte interesantă. Aceste rezultate sugerează că genomul viabil ar putea rămâne chiar și cu un tratament la temperatură înaltă.

De fapt, atât EhV, cât și ASFv și-au pierdut infecțiozitatea cu tratamente termice la 50°C și 60°C, conform raportului publicat atât de UMN, cât și de lucrarea de laborator de referință ASFv din Germania, precum și în publicațiile anterioare. Ambele studii au demonstrat că tratamentele termice au fost eficiente în reducerea infecțiozității. Alte metode, cum ar fi expunerea virală la UV-C, ar putea oferi o asigurare suplimentară pentru inactivarea virusurilor rezistente, cum ar fi ASFv.

Este necesară dezvoltarea ulterioară și validarea științifică